丁香叶忍冬 一种丁香叶忍冬组培快繁的方法技术

2018-06-07 - 丁香叶

【技术实现步骤摘要】 本专利技术属于组织培养 ,具体涉及一种丁香叶忍冬组培快繁的方法。 技术介绍 丁香叶忍冬(学名:Lonicera oblata)是忍冬科忍冬属的植物,是中国的特有植物。分布在中国大陆的河北等地,生长于海拔1,200米的地区,一般生于多石山坡上,目前尚未由人工引种栽培。

丁香叶忍冬

在2008年3月公布的《北京市重点保护野生植物名录》中,丁香叶忍冬位列其中,为北京市二级重点保护野生植物。目前可以见到的丁香叶忍冬位于延庆松山百瀑泉西北约200m处在海拔1100m以上的林下,上层乔木有油松、华北五角枫等,仅有两株。

丁香叶忍冬

因此,保护丁香叶忍冬,扩大其存在数量达到了刻不容缓的地步。而组培由于其性状稳定、繁殖速度快等优点,是扩大其存在数量的一种有效的手段,但是目前对于丁香叶忍冬的研究较少,更没有关于丁香叶忍冬组织培养方面的研究。

丁香叶忍冬

技术实现思路 本专利技术的目的在于提供一种丁香叶忍冬组培快繁的方法,能够快速建立起丁香叶忍冬的组培快繁体系,可以实现丁香叶忍冬的快速增殖。

为了实现上述目的,本专利技术提供如下技术方案:一种丁香叶忍冬组培快繁的方法,包括如下步骤:(1)外植体的选择及处理:外植体用野外植株茎段的腋芽,野外采集外植体应避免二次污染,用剪刀剪下茎段以干净封口袋保存,外植体不超过两天,并且不能沾水;(2)外植体的消毒:用剪刀把外植体剪成带两三个腋芽的茎段放烧杯中,先加入几滴洗洁精,再加水冲洗,并重复一次,用自来水洗到基本无泡沫时,自来水冲洗时间不易过长以免造成外植体二次污染,在超净台中先用70%的酒精浸1分钟,无菌水冲洗2次,用加入两滴吐温的质量浓度为5%的次氯酸钠溶液消毒5分钟,用无菌水洗5次;再用加入两滴吐温的质量浓度为0.

丁香叶忍冬

1%的升汞消毒10分钟,后用无菌水洗6次;(3)接种培养:将茎段剪成1cm左右,每段带两个腋芽,接种到接种培养基中,所述接种培养基为GS的大量元素 去除大量元素的MS 6-BA 0.

05mg\\L IBA 0.0025mg\\L 糖30g/L,每瓶只接一段外植体,培养2-3天开始生长,每30天接转一次;(4)生根培养:将经过继代培养的分化芽转移到生根培养基上诱导生根,所述生根培养基为:GS的大量元素 去除大量元素的MS IBA 0.

丁香叶忍冬

0025-0.0035mg\\L 糖20g/L,诱导生根约25天开始生根,当根生长到3cm左右出瓶。优选地,步骤(3)的培养条件为:温度23±1℃,光照时间12小时,光照强度1000Lx左右,培养介质pH值为6.

2。优选地,步骤(4)的培养条件为:23±1℃,光照时间12小时/天,光照强度2000Lx左右,pH值为6.2。优选地,还包括组培苗移栽,具体如下:出瓶前练苗一周,先将培养瓶移至温室,自然条件下炼苗2d,然后解开封口膜,炼苗5d,炼苗完成后取出小苗洗净根部附着的培养基,用多菌灵或百菌清1000倍液清洗并浸泡幼苗根部,后移栽到经消毒的基质中,温度控制在24-26℃,湿度控制在70%左右,15d以后逐渐降低湿度,直至将移栽苗置于自然条件下,炼苗移栽期间适当遮光,使光照强度为自然光的50%。

优选地,所述的栽培基质用腐殖土、园土和沙按照1∶1∶1的体积比混合而成。

本专利技术的有益效果是:申请人在组培过程中发现,将常规的MS作为基础培养基,在接种后,外植体出现了变黑坏死的情况,为了克服上述问题,申请人创造性得引入GS培养基,并且仅采用其大量元素,同时去除MS的大量元素,将其合并组成基础培养基后,可以克服上述变黑坏死的情况;另外,申请人还发现丁香叶忍冬的外植体对激素浓度较敏感,激素浓度按照本领域常规的浓度设定后,外植体出现大量愈伤组织,而并没有出现分化,因此,本申请大大降低了激素的浓度,从而克服上述缺陷。

按照本申请的组培方法,丁香叶忍冬的成活率在90%左右。本专利技术通过系统的研究,对丁香叶忍冬各个培养阶段的培养基进行了优选,首次建立了丁香叶忍冬的组织培养体系,提供了一整套的采用丁香叶忍冬的腋芽作为外植体进行培养的方法,可以生产整齐一致的丁香叶忍冬幼苗,为丁香叶忍冬的快速繁殖提供了有效的支持,为丁香叶忍冬的开发利用提供了技术保证,也为进一步探索丁香叶忍冬的基因工程、拓宽外植体材料等奠定了基础。

并且本专利技术培养过程速度快,再生频率较高,并且变异率较低,周期相对较短,能较好地保持丁香叶忍冬的遗传稳定性。

附图说明图1是本专利技术实施例1丁香叶忍冬经过继代增殖培养出来的苗生长状况。图2是对比例1的苗生长状况。图3是对比例2的苗生长状况。具体实施方式下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明,均为常规方法。

下述实施例中所用的材料、试剂等,如无特殊说明,均可从商业途径得到。实施例1一种丁香叶忍冬组培快繁的方法,包括如下步骤:(1)外植体的选择及处理:外植体用野外植株茎段的腋芽,野外采集外植体应避免二次污染,用剪刀剪下茎段以干净封口袋保存,外植体不超过两天,并且不能沾水;(2)外植体的消毒:用剪刀把外植体剪成带两三个腋芽的茎段放烧杯中,先加入几滴洗洁精,再加水冲洗,并重复一次,用自来水洗到基本无泡沫时,自来水冲洗时间不易过长以免造成外植体二次污染,在超净台中先用70%的酒精浸1分钟,无菌水冲洗2次,用加入两滴吐温的质量浓度为5%的次氯酸钠溶液消毒5分钟,用无菌水洗5次;再用加入两滴吐温的质量浓度为0.

1%的升汞消毒10分钟,后用无菌水洗6次;(3)接种培养:将茎段剪成1cm左右,每段带两个腋芽,接种到接种培养基中,所述接种培养基为GS的大量元素 去除大量元素的MS 6-BA 0.05mg\\L IBA 0.

0025mg\\L 糖30g/L,每瓶只接一段外植体,培养2-3天开始生长,每30天接转一次;培养条件为:温度23 1℃,光照时间12小时,光照强度1000Lx左右,培养介质pH值为6.2(4)生根培养:将经过继代培养的分化芽转移到生根培养基上诱导生根,所述生根培养基为:GS的大量元素 去除大量元素的MS IBA 0.

003mg\\L 糖20g/L,诱导生根约25天开始生根,当根生长到3cm左右出瓶,培养条件为:23±1℃,光照时间12小时/天,光照强度2000Lx左右,pH值为6.

2。(5)组培苗移栽,具体如下:出瓶前练苗一周,先将培养瓶移至温室,自然条件下炼苗2d,然后解开封口膜,炼苗5d,炼苗完成后取出小苗洗净根部附着的培养基,用多菌灵或百菌清1000倍液清洗并浸泡幼苗根部,后移栽到经消毒的基质中,温度控制在25℃,湿度控制在70%左右,15d以后逐渐降低湿度,直至将移栽苗置于自然条件下,炼苗移栽期间适当遮光,使光照强度为自然光的50%。

所述的栽培基质用腐殖土、园土和沙按照1∶1∶1的体积比混合而成。对比例1接种和生根培养基的基础培养基均改为MS,其余同实施例1。最终培养得到的组培苗生长状况见图2。

对比例2生根培养基的IBA浓度改为0.01mg\\L,其余同实施例1。最终培养得到的组培苗生长状况见图3。专利技术人经研究发现,使用MS作为基础培养基的,出现了变黑坏死的现象,且浓度调高之后,出现了大量的愈伤组织,而将MS培养基换为本申请的培养基,且浓度降低之后,上述问题均未出现。本文档来自技高网...

【技术保护点】 一种丁香叶忍冬组培快繁的方法,其特征在于,包括如下步骤:(1)外植体的选择及处理:外植体用野外植株茎段的腋芽,野外采集外植体应避免二次污染,用剪刀剪下茎段以干净封口袋保存,外植体不超过两天,并且不能沾水;(2)外植体的消毒:用剪刀把外植体剪成带两三个腋芽的茎段放烧杯中,先加入几滴洗洁精,再加水冲洗,并重复一次,用自来水洗到基本无泡沫时,自来水冲洗时间不易过长以免造成外植体二次污染,在超净台中先用70%的酒精浸1分钟,无菌水冲洗2次,用加入两滴吐温的质量浓度为5%的次氯酸钠溶液消毒5分钟,用无菌水洗5次;再用加入两滴吐温的质量浓度为0.

1%的升汞消毒10分钟,后用无菌水洗6次;(3)接种培养:将茎段剪成1cm左右,每段带两个腋芽,接种到接种培养基中,所述接种培养基为GS的大量元素 去除大量元素的MS 6‑BA 0.

05mg\L IBA 0.0025mg\L 糖30g/L,每瓶只接一段外植体,培养2‑3天开始生长,每30天接转一次;(4)生根培养:将经过继代培养的分化芽转移到生根培养基上诱导生根,所述生根培养基为:GS的大量元素 去除大量元素的MS IBA 0.

0025‑0.0035mg\L 糖20g/L,诱导生根约25天开始生根,当根生长到3cm左右出瓶。...

【技术特征摘要】 1.一种丁香叶忍冬组培快繁的方法,其特征在于,包括如下步骤:(1)外植体的选择及处理:外植体用野外植株茎段的腋芽,野外采集外植体应避免二次污染,用剪刀剪下茎段以干净封口袋保存,外植体不超过两天,并且不能沾水;(2)外植体的消毒:用剪刀把外植体剪成带两三个腋芽的茎段放烧杯中,先加入几滴洗洁精,再加水冲洗,并重复一次,用自来水洗到基本无泡沫时,自来水冲洗时间不易过长以免造成外植体二次污染,在超净台中先用70%的酒精浸1分钟,无菌水冲洗2次,用加入两滴吐温的质量浓度为5%的次氯酸钠溶液消毒5分钟,用无菌水洗5次;再用加入两滴吐温的质量浓度为0.

1%的升汞消毒10分钟,后用无菌水洗6次;(3)接种培养:将茎段剪成1cm左右,每段带两个腋芽,接种到接种培养基中,所述接种培养基为GS的大量元素 去除大量元素的MS 6-BA 0.

05mg\\L IBA 0.0025mg\\L 糖30g/L,每瓶只接一段外植体,培养2-3天开始生长,每30天接转一次;(4)生根培养:将经过继代培养的分化芽转移到生根培养基上诱导生根,所述生根培养基为:GS的大量元素 去除大量元素的MS IBA 0.

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