姜黄素的危害 姜黄素诱导的DA损伤和细胞凋亡及其机制的研究

2018-02-01 - 姜黄素

复旦大学碗士学位论文 中文摘要 中文摘要 【目的】姜黄素是一种天然提取的植物多酚,广泛应用于食品、药物和化妆品中。 就像一些熟知的抗氧化剂一样,姜黄素也可能发挥“双刃剑”作用——尽管姜 黄素通常表现抗氧化性,但在特定的条件下,它也会表现出促氧化特性。

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本文 用体外实验研究姜黄素诱导的DNA损伤和细胞凋亡及其作用条件、剂量一反应 关系和时间.效应关系,初步探讨其可能的作用机制。 l方法】(1)姜黄素诱导细胞DNA损伤:采用单细胞凝胶电泳方法,结合细胞活 Cu2十存在的条件下, 性测定方法,检测肛100 gmol/L gmol/L姜黄素在有或无100 养2b后的修复情况。

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(2)姜黄素诱导细胞凋亡与氧化应激水平的关系:姜黄素作 用于CHL细胞,显微镜下观察细胞形态变化;流式细胞仪计数分析细胞周期时 相及凋亡率;用吖啶橙/溴化乙啶双染色法测定细胞的凋亡率和膜受损率;流式 DNA氧化损伤: 细胞仪测定细胞内产生的活性氧。

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(3)姜黄素诱导质粒pBR322 在不同浓度Cu2 (叽200岬。此)或抑制剂(过氧化氢酶、硫脲、叠氮化钠及浴铜 胶电泳后,扫描采集电泳图像,测定质粒DNA各种构型的光密度值,计算超螺 旋型DNA所占的百分LE(SC%)。

cu2 后, 加入100¨mol/L CHL细胞的存活率仍均>80%,而5肛100岬。儿的 姜黄素作用于SMMC7721细胞,细胞的存活率都降到80%以下;修复前后细胞 存活率变化不大。

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②姜黄素单独作用时,25斗mol/L及其以上浓度的姜黄素引起 性变化(P<o.05),而对于CHL细胞,≥50岬ol/L的姜黄素才诱导这样的变化: 以上浓度的姜黄素才引起CHL细胞彗星指标的变化。

③25~50脚。地的姜黄素 和25岬ol,L姜黄素 100岬ol/LCu”作用下的SMMC7721细胞,其修复程度 Cu2 作用于CHL 要大于CHL细胞(P<0.

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05)。④100扯mol/L的姜黄素 100“mol/L Cu2 作用于 细胞,100¨m01/L姜黄素和5∞100肛mol/L姜黄素 100岬ol/L SMMC 7721细胞,损伤不能在2小时内修复,并产生一些凋亡样细胞的彗星图 像。

复旦大学硕士学位论文 中文摘要 (2)100I.tmol/L 胞2h后,与对照组比较,发现:①细胞形态发生改变,大量细胞明显变圆,细 胞密度降低,细胞间隙增宽;且随姜黄素浓度的增加,可见细胞膜逐渐皱缩, 细胞逐渐体积缩小,细胞内颗粒逐渐增多,出现较多悬浮死亡细胞。

②细胞周 期发生变化,s期细胞明显增多,G2期细胞减少。③CHL细胞的凋亡率明显增 加,以早期凋亡细胞为主;随姜黄素浓度的增加,活细胞数减少,晚期凋亡细 胞和死细胞增多。

④产生的活性氧量明显增加,且随作用时间的延长(0-2h),100 Cu2 诱导CHL细胞产生的活性氧的量随之增加, pmol/L姜黄素 100“mol/L 呈现时间依赖性。

DNA损伤;但在 (3)①单独的姜黄素或cu2 作用不引起质粒pBR322 p.mol/L姜黄 [Cu2 1≥100肚moFL时,姜黄素诱发DNA剂量依赖性损伤。②200 Cu2 对DNA的损伤作用呈现时间依赖性增强反应。③抗氧化剂 素 200岬ol/L 的DNA损伤;Cu 的特异络合剂B

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